新型冠状病毒的发病原因主要是因为严重的急性呼吸系统综合症冠状病毒2型所引发的一种传染性疾病。当感染新冠病毒后，普遍会出现咳嗽、发烧、呼吸急促等症状。
一、PCR技术的定义
PCR(聚合酶链反应)通常是检测冠状病毒的常规方法，这是一种在生物学中使用频率非常高的一种方法，可以迅速复制上百万乃至数十亿份的指 定DNA片段。
新冠病毒包括一个较长的RNA(核糖核酸)单链基因组， 为了使用PCR对这些病毒进行检测，RNA分析一定要经过逆 转录酶改变为它们互相弥补的DNA队列，接着构成一种新的DNA，能够利用标准的RCR程序进行扩增，这种方法就是RT-PCR。
二、PCR扩增的流程
首先，将模板DNA加热到94摄氏度左右，同时保持规定的时间后，按照DNA半保留复制的要求和碱基互补配对的原理，在复制过程中解链双链DNA，使其从双链转变为单链，为下一轮的反应做好准备;其 次，当模板DNA改变为单链之后，待温度下降到大约55摄氏度，就能够整合模板DNA单链 的互补序列配对;最后，当温度再次升高为大约72摄氏度时，开始充分发挥DNA聚合酶的作用，它会按照碱基互补配对的原则，把游离的脱氧核糖核苷 酸一个一个地增加到单链DNA上，这个过程好比在新建一个DNA链条，其中一部分来自原来的旧链，另一部分是新添加的dNTP(脱氧核糖核苷三磷酸) 形成的，最终， 这个新生成的链条与原来的旧链共同形成了一个杂合的双链DNA。这种杂合双链DNA的结构，既包含了旧链的遗传信息，又加入了新的遗传信息，从而实现了DNA的复制和遗传信息的传递。
三、实时荧光 PCR 技术测定的基本原理
当PCR扩增过程时，增加一对引物的基础上还会添加一个具有特异性能的荧光探针， 这个探针的两头分别标注着一个报告荧光基团与一个淬灭荧光基团。最初，探针能够完好地融入DNA任何一条单链上面，淬灭荧光基团会吸收报告基团发射的荧光信号，然后不会检测到荧光信号;随着PCR不断扩增，Taq酶就会降解探针酶，接着分离报告荧光基团与淬灭荧光基团，进而可以让荧光监测系统接受到荧光信号，所说的就是每次扩增一条DNA链，就会形成一个荧光分子，最终可以同步荧光信号的积累和PCR产物。
四、实时荧光 PCR 技术检测新型冠状病毒的方法
当接诊新冠病毒患者时，医护人员首要工作是穿戴好防护服，在疑似感染患者身上采集样本，然后将这些样本送到实验室。医护人员运用一种特殊性的试剂，在样本中提取新型冠状病毒的RNA，这个过程是“核酸提取”。然后，提取出来的RNA会使用反转录酶这种物质转变为DNA。接着医护人员会利用聚合酶链式反应技术，扩增该DNA，方便更加精准地检测。PCR技术可以快速增加DNA 的数量，在扩增DNA期间，医护人员还会使用一种特殊性的荧光探针， 这个荧光探针随着DNA的扩增会发出荧光，这样医护人员就能够鉴定样本中是否存在新型冠状病毒RNA，了解病毒的浓度。若在该样本中检测到新型冠状病毒RNA，则该样本就是阳性，表明感染了新型冠状病毒，若没有检测到RNA，表明是阴性，说明没有感染该病毒。
五、结论
当对实时荧光PCR技术的使用流程进行充分了解之后，可以理解为什么在有些情况下，新型冠状病毒核酸检测的结果会呈阴性，主要是因为这种技术在检测样本病毒时，对病毒的数量有一定的要求，如果病毒数量缺少，或许就检测不到。另一方面，由于在不同病人身上所采集的样本同样会有所不同，例如患者的状态、采集位置等，造成病毒数量不够。在这种状况下，医护人员往往会根据CT扫描的结果，同时进行数次病毒核酸检测，尽可能保证检测的精准性，利用这种方法，即便病毒数量不足，同样能够确诊患者是否感染了新冠病毒。
因此，虽然实时荧光PCR技术已经非常精准与灵敏，但是同样需要根据其他诊断方法进行综合判断，这才能够更加精准地鉴定患者是否感染了新冠病毒。 (广西壮族自治区崇左市疾 病预防控制中心主管检验技师 王江莲)
发刊日期：2024-02-05
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